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¿Qué son las técnicas histológicas?
Son métodos de estudio que se utilizan para observar un tejido y examinarlo en un
microscopio. La técnica histológica CONSERVA la forma, tamaño y estructura de la
muestra de tejido lo más exacto posible.
Para comprender la técnica, hay que seguir una serie de pasos:
PASOS A SEGUIR:
1. Obtención de la muestra (Biopsia o Necropsia)
2. Fijación
3. Inclusión
4. Cortes
5. Montaje
6. Coloración
PASO 1
El primer paso es obtener una muestra, ya sea necropsia (Muestra cadavérica) o Biopsia
(Muestra de un ser vivo)
Hay varios tipos de biopsias:
Incisional: Solo se extrae una parte de la lesión
Excisional: Extirpa toda la lesión
Sacabocado: Se usa en la piel
Punción: Percutánea o endoscópica
Absorción: Aspirar medula ósea
Trepanación: Acceder al cráneo por agujeros.
Raspado: Se extrae la capa más superficial de la piel
PASO 2
Una vez obtenida la muestra, se busca fijar el tejido, es decir, que quede paralizado y este
lo más parecido posible a su forma VIVA para evitar la autodegradación del tejido por los
lisosomas. La fijación también destruye microorganismos en el tejido, le da dureza y facilita
los cortes a futuro.
¿Cómo se fija? -> Se sumerge la muestra en una sustancia. ¿Cuál sustancia?
Hay 2 tipos de fijadores: FISICOS Y QUIMICOS.
1. Físicos: Desecación (frotis), congelación, calor.
2. Químicos: Formol al 37%, pero no fija bien las membranas celulares
La fijación puede hacerse por: perfusión (solución fijadora por el sistema circulatorio) o
inmersión (El tejido sumergido en la solución fijadora)
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PASO 3
La inclusión de la muestra se hace en PARAFINA, ¿para qué? Para lograr cortes delgados.
Se hace una serie de pasos para poder lograr la INCLUSIÓN
1. Deshidratación: La muestra se lava, y se deshidrata con soluciones alcohólicas de
forma creciente hasta el 100% para sacar el agua de nuestra muestra. (50% de
alcohol, luego 60, 70, etc…) ya que la parafina no es miscible en agua ni alcoholo
2. Aclaración: Para la aclaración se usa un solvente orgánico como el XILENO o el
TOLUENO que SI SON MISCIBLES en alcohol y parafina.
Luego, la muestra con parafina se funde a 60°, la parafina penetra todo el tejido, se enfría
y endurece.
¿Qué tenemos al final del paso 3? Un taco de parafina de nuestra muestra endurecido.
PASO 4
Llego el momento del corte de nuestro TACO.
El Taco se coloca en una maquina especial para hacer el corte que se llama MICROTOMO,
hace cortes muy finos, aproximadamente de 5-10um para que la luz del microscopio lo
pueda atravesar. Los cortes nunca van a ser iguales, o precisos.
PASO 5
Ahora sigue el montaje de los cortes. Primero tenemos que retirar toda la parafina del
corte con xileno o xilol, esto se llama desparafinar. Cada corte se monta en un
portaobjetos de vidrio, y se vuelve a hidratar para luego poder teñir la muestra, la
rehidratación es con soluciones alcohólicas de manera descendentes, (bajar el nivel de
alcohol, no subirlo).
Por tantos pasos requeridos, algunas macromoléculas del corte se van a perder. Ejemplo,
lípidos, proteoglucanos, glucógeno…
PASO 6
La técnica de tinción más común es la de HEMATOXILINA (Violeta) Y EOSINA (Rosa)
Es una coloración dicrómica, es decir, doble.
Se van a teñir todas las moléculas que queden en nuestro corte.
La hematoxilina es un colorante POSITIVO BÁSICO, catiónico, entonces al
momento de teñir algo, reacciona con moléculas de carga negativa (núcleo,
citoplasma) tiñéndolos de un VIOLETA AZULADO. Se llama basófilo.
La eosina es un colorante NEGATIVO ÁCIDO, aniónico, entonces al momento de
teñir algo reacciona con moléculas de carga positiva (proteínas básicas del
citoplasma, filamentos citoplasmáticos y fibras extracelulares) tiñéndolos de
ROSADO. Se llama eosinofilo-acidofilo.
TINCIONES:
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AZUL DE TOLUIDINA
Colorante básico (carga +), tiñe de color azul, y cuando se encuentra con sustancias como
los GAG sulfatados, heparina, etc… su color cambia de Azul a violetita, esto se conoce
como metacromasia.
PAS
Colorante rojo-púrpura, se usa para observar carbohidratos, glucoproteínas, gag,
glucógeno, membrana basal, fibras reticulares…
TRICRÓMICO DE AZAN
Se compone de 3 colorantes que son los siguientes:
Azocarmín acido, tiñe de rojo los núcleos.
Azul de anilina básico, tiñe de azul fibras colágenas.
Naranja G ácido, tiñe de naranja amarillo el citoplasma, tejido muscular, eritrocitos
VARIANTE DE MALLORY-AZAN: ¿Qué es estoooo?, esta variante reemplaza el
azocarmín por un colorante rosado llamado fucsina ácida
TRICRÓMICO DE GOMORI
Sirve para el tejido conectivo, tejido muscular
De color verde luz tiñe las fibras colágenas
De color cromotropo, tiñe de rojo el tejido muscular, citoplasmas, eritrocitos…
De color hematoxilina azul, tiñe los núcleos
TRICRÓMICO DE MASSON
Hematoxilina férrica: Tiñe de azul oscuro-negro los núcleos
Fucsina ácida: Tiñe de rojo intenso/rosado a los eritrocitos, tejido muscular,
citoplasma.
Azul de anilina: Tiñe de azul verdoso el tejido conectivo y fibras colágenas
TRICRÓMICO DE GOLDNER
Hematoxilina de groat: tiñe de marrón a negro los núcleos
Fucsina acida PUNZÓ y NARANJA G combinada: tiñe de rojo/naranja el tejido
muscular y el citoplasma
Verde luz: tiñe de verde el tejido conectivo y fibras colágenas
VAN GIESON (tinción)
Hematoxilina férrica de Weigert: Esta tiñe de negro azulado los núcleos
Ácido pícrico: Tiñe de amarillo anaranjado el tejido muscular y citoplasma
Fucsina ácida: tiñe de rojo el tejido conectivo y sus fibras colágenas
ORCEINA
Sirve para identificar fibras elásticas y las tiñe de color pardo
ALDEHÍDO FUCSINA
También sirve para identificar fibras elásticas, y tiñe de tonalidad violeta (violetita clarito)
TÉCNICA DE VERHOEFF
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Otra técnica más para las fibras elásticas, pero menos común, las tiñe de color negro.
AZUL LUXOL
Técnica de coloración que tiñe de AZUL la mielina (lipoproteínas) de las fibras nerviosas.
Y de color VIOLETA cresilo que es un colorante básico, se tiñen las estructuras ácidas
(Sust. De Nissl, núcleo, nucléolo de las neuronas, núcleo de Glia)
Las neuronas solo están presentes en las sustancias gris, la sustancia blanca está
formada fundamentalmente por fibras nerviosas
TÉCNICA DE MAY GRUNWALD GIEMSA
Técnica que sirve para identificar las células de la sangre periférica y frotis de medula
ósea, esta técnica tiñe con azul de metileno-eosina-azur de metileno estas células.
IMPREGNACIÓN ARGÉNTICA
Los Tejidos son tratados con sales de plata, con esta técnica se identifican fibras
reticulares, fibras nerviosas y células de la neuroglia (snc)
TINCIONES ESPECIALES PARA TEJIDO ADIPOSO Y LÍPIDOS EN GENERAL
Se usan MUCHO las técnicas de SUDÁN 3 para grasa roja, SUDAN 4 grasa de rojo intenso,
Y SÚDAN NEGRO para grasa negra.
Son colorantes sin afinidad por estructuras ÁCIDAS O BÁSICAS, insolubles en agua, pero
más solubles en lípidos que en el medio en el que están disueltos. Se usan con una solución
alcohólica, el mejor fijador para estas muestras es el FORMOL, se usa en cortes
congelados, y con reactivos de hematoxilina o carmín para dar contraste, resultado:
núcleos azules
INMUNOHISTOQUÍMICA
Con esta técnica se puede observar la reacción de un antígeno y su anticuerpo especifico,
el anticuerpo puede verse como una sustancia fluorescente, o al anticuerpo se le puede
adosar una enzima llamada peroxidasa que detecta la reacción ag-ac.
HISTOQUÍMICA ENZIMÁTICA
Es un método que evidencia la actividad enzimática en algunos tejidos, ¿qué hace esta
reacción? -> Convierte unos sustratos solubles e incoloros en productos insolubles y
coloreados, la inversa.
TECNICAS HISTOLOGICAS HYE - @STUDY.ORIMED - UNLP.pdf
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