Volver a Genética Médica
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 1 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
GUÍA DE PROCEDIMIENTO
CARIOTIPO + BANDAS GTG EN SANGRE PERIFÉRICA
UNIDAD DE SOPORTE AL DIAGNÓSTICO Y TRATAMIENTO
SUB UNIDAD DE SOPORTE AL DIAGNÓSTICO –GENÉTICA
Elaborado por:
Sub Unidad de Soporte al
Diagnóstico-Genética
Revisado por:
Unidad de Soporte al
Diagnóstico y Tratamiento
Unidad de Gestión de la
Calidad
Aprobado por:
Dra. Elizabeth Zulema
Tomás Gonzales de
Palomino
Directora del Instituto
Nacional de Salud del Niño
San Borja
Firmado digitalmente por VELIZ
SILVA Emma Victoria FAU
20552196725 soft
Motivo: Doy V° B°
Fecha: 12.04.2022 12:38:29 -05:00
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 2 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
GUÍA DE PROCEDIMIENTO
CARIOTIPO + BANDAS GTG EN SANGRE PERIFÉRICA
I. Título .......................................................................................................................................................... 3
II. Finalidad ................................................................................................................................................... 3
III. Objetivos ................................................................................................................................................... 3
a. Objetivos Generales ........................................................................................................................ 3
b. Objetivos Específicos ..................................................................................................................... 3
IV. Ámbito de aplicación ........................................................................................................................... 3
V. Nombre del Proceso o Procedimiento a Estandarizar y Código CPMS ........................... 4
VI. Consideraciones Generales ............................................................................................................... 4
a. Definiciones Operativas ................................................................................................................ 4
1. Definición del Procedimiento .............................................................................................. 4
2. Aspectos Epidemiológicos importantes .......................................................................... 5
3. Consentimiento Informado ................................................................................................... 5
b. Conceptos básicos ........................................................................................................................... 6
c. Requerimientos Básicos ............................................................................................................... 7
VII. Consideraciones Específicas ........................................................................................................... 11
a. Descripción detallada del Proceso o Procedimiento: ..................................................... 11
b. Indicaciones ..................................................................................................................................... 16
c. Riesgos o Complicaciones Frecuentes .................................................................................. 17
d. Riesgos o Complicaciones poco Frecuentes: ...................................................................... 17
e. Contraindicaciones ....................................................................................................................... 17
VIII. Recomendaciones ............................................................................................................................... 17
IX. Autores, Fecha y Lugar ...................................................................................................................... 17
X. Anexos ...................................................................................................................................................... 19
XI. Bibliografía............................................................................................................................................. 21
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 3 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
GUÍA DE PROCEDIMIENTO
CARIOTIPO + BANDAS GTG EN SANGRE PERIFÉRICA
I. Título
Guía de Procedimiento Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica.
II. Finalidad
Contribuir con la mejora continua de los servicios de salud del INSN-SB, garantizando la
correcta ejecución de acuerdo a estándares internacionales, del procedimiento para el
diagnóstico cito-genético de alteraciones en el número y estructura de cromosomas en
pacientes pediátricos con sospecha o que requieren confirmación de un diagnóstico
clínico, controlar el cumplimiento de las acciones y facilitar el trabajo a nuevas
incorporaciones a la Sub Unidad de Soporte al Diagnóstico-Genética del INSN-SB.
III. Objetivos
a. Objetivos Generales
Estandarizar Proporcionar resultados confiables y oportunos siguiendo un criterio por
consenso para una práctica de rutina, a fin de que el médico tratante tenga a mano la
información requerida para realizar un diagnóstico médico y/o consejería genética.
b. Objetivos Específicos
Obtener una excelente morfología y calidad de las bandas de cromosomas en una
muestra de sangre venosa.
Observar con intervención de personal profesional especializado cualquier
cambio en los cromosomas a través de la captura de una serie de imágenes”).
IV. Ámbito de aplicación
La presente “Guía de Procedimiento” es de aplicación en la Sub Unidad de Soporte al
Diagnóstico- Genética del Instituto Nacional de Salud del Niño, San Borja o de un
establecimiento de salud del tercer nivel del MINSA.
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 4 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
La población objetivo la constituyen todas las personas en edad pediátrica que
requieran la detección de alteraciones cromosómicas.
V. Nombre del Proceso o Procedimiento a Estandarizar y Código
CPMS
Nombre del Procedimiento
Código CPMS
Cariotipo + Banda GTG en Sangre Periférica
88293
VI. Consideraciones Generales
El estudio en sangre periférica permite analizar los cromosomas en los linfocitos de
los pacientes con sospecha de patologías constitucionales y adquiridas (véase
definiciones en “Conceptos Básicos”) proporcionando información para el
diagnóstico, pronóstico y/o tratamiento y seguimiento de enfermedades
hematológicas y oncológicas, así como para el asesoramiento genético
correspondiente.
a. Definiciones Operativas
1. Definición del Procedimiento
El cariotipo con bandas GTG en linfocitos de sangre periférica es la técnica más
utilizada para el análisis de anomalías cromosómicas tanto numéricas como
estructurales y se obtiene mediante digestión enzimática con tripsina de las proteínas
cromosómicas, seguida de una tinción de Giemsa. Con este método se obtiene un
patrón de hasta más de 800 bandas, entre claras y oscuras para cada genoma
haploide, cuyo patrón es específico de cada cromosoma. Esta resolución permite
detectar deleciones y duplicaciones de un tamaño superior a 5-8 Mb. La técnica
requiere células en división y detecta anomalías a nivel de una única célula,
permitiendo identificar la existencia de heterogeneidad celular (mosaicismo
cromosómicos).
El procedimiento comprende las etapas de recepción y codificación de la muestra, su
cultivo en medios especiales y enriquecidos, la cosecha celular, la preparación de
láminas portaobjetos, maduración de la muestra en la láminas, finalizando con el
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 5 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
bandeo y coloración de la muestra utilizando para ello la técnica de bandeo GTG y
tinción de Giemsa.
El análisis de las muestras la realiza un citogenetista por observación de las metafases
cromosómicas a través de un microscopio óptico con objetivo de 100x. El
citogenetista realiza la captura de una serie de imágenes de la metafase celular en un
cariotipador o analizador automático de cromosomas. Este equipo emitirá un
cariograma de las células seleccionadas por el citogenetista permitiéndole la
caracterización de las alteraciones cromosómicas, para finalmente completar un
reporte en un formato establecido por la Sub Unidad de Soporte al Diagnóstico-
Genética, el cual se encuentra implementado en el programa del cariotipador.
2. Aspectos Epidemiológicos importantes
Los defectos congénitos de cualquier tipo afectan a un 6 a 7% de la población de
niños, considerando los niños recién nacidos. Una de las causas conocidas de los
defectos congénitos son las alteraciones cromosómicas que pueden ser de dos tipos:
alteraciones numéricas (que afectan al número de cromosomas) y alteraciones
estructurales (que afectan a la estructura).
Estudios de investigación señalan que las anomalías numéricas representan el 83,4%
de los casos con alteraciones cromosómicas, mientras que el 15.8% corresponden a
alteraciones estructurales, y un 0.85% a casos con una alteración numérica y una
estructural - fundamentalmente son trisomía 21, o monosomía X, que además tienen
una alteración estructural de otro cromosoma, que puede estar en balance o en
desbalance.
3. Consentimiento Informado
El cariotipaje con banda GTG es una prueba citogenética de diagnóstico que busca
cambios en el número y estructura de los cromosomas. Este puede revelar un
resultado normal o anormal. El estado anormal puede explicar el cuadro clínico, o ser
causa de otra enfermedad genética no mostrada por el paciente. No se firma un
consentimiento para esta prueba en el INSN SB, sin embargo, el médico tratante quien
ordena la prueba, es responsable de informar a los padres o directamente al paciente
el motivo de la prueba, resultado esperado, así como la necesidad de otras pruebas
toda vez que los resultados no expliquen en absoluto o solo parte de la condición del
paciente.
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 6 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
b. Conceptos básicos
Metafase: es la fase de la división celular (mitosis) en la que desaparece la
membrana nuclear y los cromosomas alcanzan su máximo grado de
condensación y ordenamiento ubicándose en el plano ecuatorial de la célula.
Bandas GTG: son bandas transversales claras y oscuras en los cromosomas que
se logran con un tratamiento controlado de éstos con tripsina antes de la
coloración con Giemsa. Las bandas oscuras contienen ADN rico en bases A-T
que replica tardíamente y son pobres en genes constitutivos y las bandas claras
contienen ADN rico en G-C que replica tempranamente y tienen muchos genes
constitutivos. Cuando un cromosoma está más elongado puede mostrar un
mayor número de bandas y esto se aprovecha para estudiarlo con mayores
detalles.
Cariotipo: Dotación cromosómica completa de un individuo o una especie, que
puede observarse durante la metafase al microscopio óptico. El término
también se refiere a la representación gráfica de los cromosomas, ordenados en
pares de homólogos y que se puede describir conforme a una nomenclatura
convencional.
Cariotipo constitutivo: Es el cariotipo con el que nace un individuo. Este puede
modificarse durante la vida por envejecimiento celular, patología
oncohematológica, trasplante de médula ósea, terapia génica o por exposición a
mutágenos a altísimas dosis, entre otras. Ej. 47,XY,+21, corresponde a un
individuo masculino que nació con Síndrome de Down.
Patologías constitucionales: Alteraciones estructurales, bioquímicas y
funcionales congénitas que afectan al individuo desde el nacimiento. Estas son
resultado de un factor hereditario o ser adquiridas durante el desarrollo
intrauterino (por agentes teratógenos) y por ende estar presentes en el
nacimiento.
Anomalías numéricas: son aquellas que comprometen el número de
cromosomas en las células del cuerpo (células somáticas), ya sea por exceso o
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 7 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
por defecto. Las células somáticas en el ser humano son diploides, es decir,
tienen 2 series o juegos de cromosomas (2n=2x=46), siendo “x” el número de
tipos de cromosomas que es igual a 23, numerados del 1 al 22, más los tipos
gonadales, X o Y.
Anomalías estructurales: son reordenamientos en uno o más cromosomas en
particular sin alterar el número modal, i.e., 2n=2x=46. Estas pueden ser
balanceadas o desbalanceadas.
Anomalías estructurales balanceadas: son aquellas en las que pedazos de
cromosomas se mueven a otro lugar conservándose la información genética
completa aunque el empaquetamiento sea distinto. Esta anomalía puede no
tener efecto sobre el paciente siempre y cuando el pedazo no se reubique en el
medio de un gen afectando de su función.
Anomalías estructurales desbalanceadas: son aquellas donde sí existe
deleción o inserción de material genético y se acompañan de un efecto
fenotípico cuyo grado dependerá de los genes comprometidos en el pedazo
faltante o duplicado.
Aneuploidías: alteración numérica que compromete solo uno, o más
cromosomas completos, ya sea por pérdida o ganancia.
Poliploidías: alteración numérica en las que se presentan más de dos juegos de
cromosomas i.e., 3x, 4x. , son de pronóstico letal.
c. Requerimientos Básicos
1. EQUIPAMIENTO DE LA ETAPA DE INICIACIÓN DEL CULTIVO
1.1. Equipos Biomédicos
Refrigerador de 4 °C
Refrigerador de -20 °C
Baño María
Cabina biológica de seguridad de flujo vertical tipo II
Desionizador de agua
Incubadora de CO2.
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 8 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
1.2. Materiales Médicos no Fungibles
Contador automático (Coulter Counter) y/o contador leucocitario.
Gradilla de polipropileno para crioviales de 2 ml y 5 ml
Frasco de cultivo celular de poliestireno graduado 25 cm3 cuello inclinado
con tapa sin filtro (T25)
Bandejas metálicas
Cajas porta láminas
Pizarra
Tijera
Timer
Pizeta
1.3. Materiales Médicos Fungibles
Pipetas descartables de 3 ml
Tips estériles para micropipeta
Jeringas de 1 ml, 3 ml y 5 ml
Papel Parafilm
Crioviales de 2 ml y 5 ml
Filtro de acetato de celulosa estéril de 0.2 x 25 mm de diámetro para jeringa
Guantes descartables
Gorras quirúrgicas
Mascarillas
Papel toalla
Recipiente de material punzocortante
Masking tape
Plumones indelebles
Plumones de pizarra
Lápiz marcador
Lapiceros
Cuaderno de registro de las muestras
Gasa
1.4. Reactivos
Medio de cultivo para sangre periférica (constitucionales)
Medio de cultivo para sangre periférica (oncohematológica)
Suero bovino fetal (SBF)
Buffer HEPES (4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid)
Etanol
2. EQUIPAMIENTO Y MATERIALES DE LA ETAPA DE COSECHA
2.1. Equipos Biomédicos
Cabina biológica de seguridad de flujo vertical tipo II
Cabina de extracción de vapores
Balanza analítica electrónica
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 9 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
Desionizador de agua
Centrífuga
Vórtex
Incubadora de CO2
2.2. Materiales Médicos no Fungibles
Micropipetas 10-100 µl
Rack para tubos de 15 ml
Frascos para laboratorio con tapa de 500 y 1000 ml
Rack para tubos de 15 ml
Dispensador para solución hipotónica
Dispensador de metanol
Dispensador de ácido acético glacial
Temporizador
Tijera
Contenedor de bioseguridad de desechos sólidos
Pizeta.
2.3. Materiales Médicos Fungibles
Tips estériles para micropipeta 100 µl
Tubos cónicos graduados de 15 ml
Pipetas descartables de 3 ml
Jeringas descartables de 1, 3 o 5ml
Guantes descartables
Gorras quirúrgicas
Mascarillas
Papel toalla
Recipiente de material punzocortante
Contenedor de bioseguridad para líquidos de desecho
Masking tape
Plumones indelebles
2.4. Reactivos
Solución salina hipotónica (KCl)
Ácido acético glacial
Metanol
Colcemid: solución de 10 µg/ml
Etanol.
3. EQUIPAMIENTO DE LA ETAPA DE PREPARACIÓN, COLORACIÓN Y ANÁLISIS DE
LAS LÁMINAS
3.1. Equipos Biomédicos
Cabina biológica de seguridad de flujo vertical tipo II
Desionizador de agua
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 10 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
Balanza analítica electrónica
Estufa
Secadora eléctrica
Agitador magnético
Microscopio óptico
Cámara trinocular
Estación de Citogenética/Cariotipador
Computadora
Impresora
3.2. Materiales Médicos no Fungibles
Micropipetas 10-100 µl
Coplin de vidrio para tinción
Soporte para tubos (“rack”)de 15 ml
Canastilla de vidrio para coloración de 25 láminas
Cubeta de metal con asa para coloración de láminas
Probetas graduadas de 250, 500 y 100 ml
Pinza de acero inoxidable
Embudo
Bagueta
Frasco para laboratorio con vidrio color ámbar de 500 y 1000 ml
Frascos para laboratorio con tapa rosca de 500 y 1000ml
Beaker de 250 ml y 500 ml
Cajas Portaláminas x 100 unidades
Pizeta
3.3. Materiales Médicos Fungibles
Tips estériles para micropipeta 100 µl
Papel aluminio
Láminas portaobjeto
Pipetas descartables de 3 ml
Guantes descartables
Mascarillas
Papel Toalla
Plumones indelebles
Papel filtro
Masking tape
Lápiz marcador
Lápiz punta de diamante
Hojas bond
Lapiceros.
3.4. Reactivos
Buffer fosfato salino (PBS)
Agua destilada
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 11 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
Tripsina
Solución NaCl 0.9 %
Colorante Giemsa
Ácido acético glacial
Metanol
Etanol
Aceite de inmersión
Glicerina
VII. Consideraciones Específicas
a. Descripción detallada del Proceso o Procedimiento:
1. RECEPCION DE LA MUESTRA :
Requisitos para una muestra óptima:
3
Un volumen mínimo de 3.0 ml contenido en un tubo con heparina sódica de
tapa verde (no usar tubo con heparina de litio, ni EDTA). En caso de
leucopenia severa se necesitará un volumen mayor.
La muestra no debe estar hemolizada, ni contener coágulos.
Deberá ser transportada inmediatamente a temperatura ambiente.
Verificar si la orden de cariotipo en sangre periférica registra los siguientes
datos:
2
o Nombres y apellidos del paciente.
o Fecha y hora de recepción.
o Número de registro.
o Conteo de leucocitos en sangre periférica.
o Diagnóstico presuntivo.
o Tratamiento recibido: antibióticos, corticoides, quimioterápicos, etc.
o Antecedentes de transfusiones o trasplantes de médula ósea.
o Nombre del médico tratante/solicitante..
2. ETAPA DE INICIACION DEL CULTIVO:
1
Antes de iniciar el proceso, encender la luz UV por 15 minutos en la cabina de
flujo laminar.
Luego encender el ventilador por 5 a 10 minutos.
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 12 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
El personal deberá colocarse: mandil, gorra quirúrgica, mascarilla y guantes
quirúrgicos.
Rotular en el frasco T25, el código de la muestra e indicar el tiempo de cultivo,
se utilizarán las siguientes abreviaturas.
Abreviaturas Tiempos de Cultivo
(24) 24 horas
(48) 48 horas
(72) 72 horas
Paciente con sospecha de enfermedad genética constitucional:
Retirar del congelador el número apropiado de frascos T25 conteniendo 5 ml
medio de cultivo para sangre periférica (constitucionales) y llevarlos a
temperatura ambiente.
Se iniciará 2 cultivos priorizando los tiempos del cultivo según el volumen de
la muestra:
URGENTE: 48 horas (1) y 72 horas (1)
72 horas (1)
Agregar con una pipeta esteril descartable, 20 gotas de la muestra de sangre
periférica a 5 ml de medio de cultivo en cada frasco T25.
Si el paciente presenta una enfermedad hematológica u oncológica:
Retirar del congelador el número apropiado de frascos con medio de cultivo
para medula osea ya que se trata de una muestra de sangre periférica (onco-
hematológica) y llevarlos a temperatura ambiente.
Se iniciará 2 cultivos priorizando los tiempos del cultivo según el volumen de
la muestra.
24 horas sin estimular
48 horas sin estimular
Realizar conteo celular utilizando el contador automático y/o cámara de
Neubauer, también pudiendo utilizar los datos del conteo leucocitario del
mismo día de la toma de muestra (incluido en la orden) y anotar el conteo en
la hoja de registro del paciente.
Agregar el volumen calculado e inocular en 5 ml en cada frasco T25, de
acuerdo a la concentración celular óptima indicada (Ver Cuadro N° 01).
Enroscar las tapas y agitar suavemente de manera circular el frasco T25, para
dispersar el volumen de muestra.
Desenroscar las tapas levemente mediante 1/2 a 1 giro cada una.
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 13 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
Rotular cada frasco de cultivo, con la fecha que será cosechado.
Colocar los frascos en posición horizontal en la incubadora de CO2 a 37 °C
durante tiempos de cultivos establecidos.
3. ETAPA DE COSECHA:
3
Preparación del Fijador (Carnoy): mezclar metanol y ácido acético en una
proporción de 3 a 1.
Encender la luz UV por 15 minutos en la cabina de flujo laminar.
Luego encender el ventilador de la cabina por 5 a 10 minutos.
El personal deberá colocarse: mandil, gorra quirúrgica, mascarilla y
guantes quirúrgicos.
En la cabina biológica de seguridad, agitar de forma circular el frasco de
cultivo T25 y hacer la transferencia a un tubo cónico de 15 ml,
inmediatamente rotular el tubo. Transferir un solo frasco de cultivo a la
vez para evitar equivocaciones
Sacar el colcemid del refrigerador y dejar a temperatura ambiente.
Agregar 80 l de colcemid a los frascos de cultivo T25 conteniendo 5 ml
del medio de cultivo, tapar y mezclar invirtiendo.
Incubar los tubos cónicos de 15 ml con las muestras con colcemid a 37 °C
por 15 minutos.
Centrifugar los tubos cónicos a 1500 rpm por 10 minutos.
Aspirar el sobrenadante usando pipetas descartables de 3 ml.
Resuspender el pellet usando la pipeta rotulada y/o golpeando
ligeramente el tubo.
Agregar de 8-9 ml de solución hipotónica KCl 0.56 % precalentada a 37 °C
usando un dispensador o directamente, luego resuspender.
Incubar los tubos cónicos por 30 minutos a 37˚C en baño maría.
Agregar 1.0 ml de fijador Carnoy a cada tubo cónico de 15ml.
Cerrar los tubos y mezclar por inversión o agitar con pipeta descartable.
Centrifugar los tubos a 1500 rpm por 10 min.
Aspirar el sobrenadante y resuspender el pellet.
Agregar 6 ml de fijador Carnoy.
Resuspender con pipetas respectivas, cerrar y mezclar por inversión.
Centrifugar los tubos a 1500 rpm por 10 minutos.
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 14 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
Aspirar el sobrenadante y resuspender el pellet.
Agregar 6 ml de fijador Carnoy.
Resuspender con sus respectivas pipetas y luego tapar los tubos cónicos.
Centrifugar los tubos a 1500 rpm por 10 min.
Repetir pasos 22 al 24 una vez más.
Aspirar parte del sobrenadante dejando suficiente volumen como para
resuspender el número de veces que sean necesarios para la preparación
de las láminas.
4. PREPARACION DE LÁMINAS:
3
Homogenizar los tubos cónicos que contienen la muestra fijada.
Agregar 25-30 µl de la muestra fijada en la lámina portaobjeto, deslizando la
punta del tip de extremo a extremo para lograr un buen extendido.
Rotular las láminas con el código del paciente.
Colocar las láminas sobre una bandeja de metal en el horno durante 24
horas a 60 °C o durante 90 minutos a 90 °C.
Retirar las láminas envejecidas del horno y se dejarán a temperatura
ambiente.
5. COLORACION: BANDEO CROMOSÓMICO CON GIEMSA:
3
Preparación de los reactivos:
o Preparación de PBS pH 7,4. Diluir 10 tabletas de PBS en un litro de
agua destilada hasta disolver completamente.
o Solución de tripsina: Disolver 0,05 g de tripsina en 50 ml de PBS en un
coplin, agitar con la bagueta y dejar a temperatura ambiente (coplin
1).
o Solución de cloruro de sodio al 0,9 %: Diluir 0,9 g NaCl en 100 ml de
agua destilada, homogenizar hasta disolver completamente, luego
colocar 50 ml en un coplin (coplin 2).
o Solución colorante Giemsa madre: Disolver 1 g de colorante Giemsa en
polvo en 84 ml de metanol. Agitar con agitador magnético. Una vez
disuelto agregar 54 ml de glicerina y continuar la agitación hasta el día
siguiente. Finalmente filtrar.
o Solución colorante Giemsa de trabajo: Mezclar 1 ml de solución
Giemsa madre con 9 ml de buffer fosfato salino.
Guía de Procedimiento: Cariotipo + Bandas GTG en Sangre Periférica
Fecha: Abril 2022
Código:GP-001/INSN-SB/USDT/SUSD-GE-V2.0
Página 15 de 21
Instituto Nacional de Salud
del Niño – San Borja
Sumergir las láminas envejecidas de 1 a 6 segundos en el coplin 1 (el
tiempo varía de acuerdo al tiempo de envejecimiento de la lámina, el
tiempo de preparación de la tripsina y la temperatura de la solución de
tripsina a utilizar)
Enjuagar inmediatamente en el coplin 2.
Colorear la lámina con la solución colorante Giemsa de trabajo por 2 a 5
minutos.
Secar la lámina con secadora eléctrica.
Evaluar el bandeo observando la lámina al microscopio a un aumento de
10X, 20X y 100x, el patrón de banda debe verse uniforme en
aproximadamente 80 % de las metafases en la lámina.
Si no se observan bandas:
o Aumentar el tiempo de exposición de tripsina o aumentar la cantidad
de tripsina en la solución de trabajo.
o Decolorar las láminas con Carnoy en un Coplin por unos 5 a 10
minutos, enjuagarlas con abundante agua de caño y dejar secar a
temperatura ambiente y colorear nuevamente
6. ANALISIS CITOGENÉTICO:
1,4-6
.
La estación de citogenética o cariotipador permite la selección de cada metafase
usando el objetivo de 10x, posterior se alterna con el de 100x para la obtención y la
transformación de imágenes de los cromosomas (Cariograma), permitiendo el mejor
análisis de las metafases obtenidas, y documentar los resultados con imágenes
digitales, abriendo la posibilidad de poder controlar, auditar, almacenar y
correlacionar los casos de genética clínica con los resultados de exámenes de
laboratorio correspondientes, como también el plantear líneas de investigación
biomédica en el área de citogenética.
La cantidad de metafases analizadas por el cariotipador será diferente
entre el análisis constitucional posnatal y el análisis de patologías
hematológicas.
Análisis Constitucional Postnatal: el estudio deberá incluir un mínimo de
20 metafases y 30 metafases en caso de mosaicismo. El análisis se
realizará a una resolución de 400-550 bandas GTG mediante el
cariotipador (Ver cuadro N° 02).
Análisis de Patologías hematológicas: se analizarán 20 metafases a una
resolución de 400-800 bandas GTG mediante un cariotipador. Se aceptará

Este documento contiene más páginas...

Descargar Completo
RD N° 000086-2022-DG-INSNSB GP. Cariotipo Banda GTG en Sangre Periférica V2.0.pdf
browser_emoji Estamos procesando este archivo...
browser_emoji Lamentablemente la previsualización de este archivo no está disponible. De todas maneras puedes descargarlo y ver si te es útil.
Descargar
. . . . .